用基因编码的脂质生物传感器对酸的非侵入性成像

科学领域:

• 细胞生物学 细胞生物学
• 生物化学 生物化学
• 显微镜的使用方法

背景情况:

• 动态脂质局部化和新陈代谢的研究具有挑战性.
• 像免疫光等传统方法需要细胞固定,而脂质类型通常不精确.
• 基因编码的脂质生物传感器提供了一种非侵入性的方法来研究活细胞中的内源性脂质.

研究的目的:

• 介绍一种用于在活的HEK293A细胞中成像酸4,5-双酸 (PI(4,5) P2) 局部化的协议.
• 利用基因编码的脂质生物传感器PH-PLCδ1进行实时脂质成像.
• 提供两种不同的成像协议,可适应不同的显微镜技术.

主要方法:

• 基因编码的PH-PLCδ1生物传感器在HEK293A细胞中的表达.
• 协议路径1:过度表达生物传感器用于共聚焦显微镜.
• 协议路径2:在单分子水平上表达生物传感器,用于全内部反射光显微镜 (TIRF).

主要成果:

• 在使用PH-PLCδ1生物传感器的活体HEK293A细胞中成功成像PI(4,5) P2定位.
• 展示了用于共聚焦和TIRF显微镜的两个可适应的协议.
• 建立一种用于动态脂质分析的非侵入性方法.

结论:

• 开发的协议使得在活细胞中特定的脂质定位的非侵入性实时成像成为可能.
• PH-PLCδ1生物传感器和概述的协议为研究脂质动态提供了宝贵的工具.
• 这种方法有助于更好地理解细胞过程中的脂质代谢和局部化.