基于快速活动的色度测量CoFi涂抹用于选工程FAD依赖氧化还原酶

科学领域:

• 生物化学 生物化学
• 分子生物学分子生物学
• 蛋白质工程是指蛋白质工程.

背景情况:

• 蛋白质变异库的高通量选对于推动生物技术的发展至关重要.
• 酶活性的功能验证仍然是蛋白质工程工作流程中的瓶.
• 现有的方法往往缺乏效率或无法直接测量酶性能.

研究的目的:

• 开发一种快速,无标签的方法来评估酶活性和可溶性.
• 为了弥合计算蛋白质设计和实验功能验证之间的差距.
• 为选工程酶库提供一个具有成本效益的工具.

主要方法:

• 开发了一种色度计殖民地过 (CoFi) 斑点测试方法.
• 为了可视化,利用了基于2,6-二二二 (DCIP) 的氧化还原合反应.
• 将该方法应用于大肠杆菌殖民地FAD-依赖的葡萄糖脱酶 (FAD-GDH).
• 同时评估酶溶解度和催化活性.

主要成果:

• CoFi blot可视化了在几分钟内直接在膜上进行的酶周转.
• 从工程图书馆成功识别出高活性FAD-GDH变体.
• 与野生型相比,型变异显示脱色光环面积增加了16倍.
• 证明了可溶性和活性的同时评估.

结论:

• CoFi blot是一种超快速,无标签和基于活动的酶功能验证方法.
• 这种方法显著加速了蛋白质变异的选.
• 该平台适用于广泛的减少DCIP的氧化降解酶.