使用Cas-CLOVER进行序列性,染色体特异性谷氨酸合成酶双重淘汰,为细胞系发育建立了增强的CHO平台
Cintia Gomez Limia1, Valeriya Steffey1, Hsueh Che Cheng1
1Demeetra AgBio, Lexington, Kentucky, USA.
Biotechnology progress
|February 22, 2026
概括
通过Cas-CLOVER基因组编辑,有效地创建了用于生物制药生产的高产量中国大鼠卵巢 (CHO) 细胞系. 这种强大的平台可以实现严格的选择和稳定的抗体表达,促进细胞系的发展.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 分子生物学分子生物学
- 基因组学就是基因组学.
背景情况:
- 中国仓鼠卵巢 (CHO) 的K1细胞对于生物制药生产至关重要.
- 开发高产细胞系需要高效的基因组编辑策略.
- 氨酸合成酶 (GS) 淘汰的CHO细胞促进了高产量的克隆选择.
研究的目的:
- 评估Cas-CLOVER在工程悬浮适应的CHO-K1细胞中的效率,用于生物制药生产.
- 建立一个强大的基因编辑平台,用于细胞系发育 (CLD).
- 将Cas-CLOVER与Cas9进行比较,用于编辑GS位置.
主要方法:
- Cas-CLOVER和Cas9被用来编辑CHO-K1细胞中的GS5和GS1位点.
- 在交付过程中使用了NeonTM传染系统.
- 双导引RNA设计被利用来产生单一和双重淘汰线.
- 港湾-IN转移酶系统被用于稳定的trastuzumab表达.
主要成果:
- 与Cas9.9相比,Cas-CLOVER显示了更高的编辑效率 (84%在GS5,74%在GS1).
- 在40个预测产生的GS淘汰赛线的预测位点中没有检测到非目标突变.
- 该CleanCut GS CHO平台产生了高生产率的克隆,生产率>100 pg/细胞/天和标位>5 g/L.
- 抗体标位稳定性在60代以上保持.
结论:
- Cas-CLOVER是一种高效和精确的基因组编辑工具,用于CHO细胞工程.
- 开发的CleanCut GS CHO平台支持严格的选择和高产量的克隆生成.
- Cas-CLOVER是一种通用工具,用于促进生物制药生产中的细胞系发展.
