使用基于重组酶聚合酶放大或嵌套PCR与CRISPR-Cas12a相结合的侧向流量测试快速和简单地检测肠道细胞种子Bieneusi

科学领域:

• 微生物学 微生物学
• 分子诊断学 分子诊断学
• 寄生虫学的寄生虫学

背景情况:

• 生虫 (Enterocytozoon bieneusi) (E. bieneusi) 是一种重要的致病原体,在人类和动物中引起疾病.
• 乙尼乌斯菌感染导致畜牧业的重大经济损失.
• 敏感和特定的检测方法对于控制E. bieneusi.usi至关重要.

研究的目的:

• 开发和验证一种用于检测E. bieneusi的新型诊断方法.
• 将嵌套PCR与CRISPR-Cas12a技术集成在一起,以提高灵敏度和特异性.
• 评估开发的方法的检测极限和适应性.

主要方法:

• 基于E. bieneusi 18S rRNA和ITS基因序列的设计crRNA和RPA原始酶.
• 从使用RPA或嵌套PCR的便样本中放大DNA.
• 使用了CRISPR-Cas12a系统,使用纯化DNA通过qPCR,光和侧流条进行检测.

主要成果:

• 已达到7.13副本/μL (RPA/CRISPR-Cas12a) 和2.35 × 10−2副本/μL (嵌套PCR/CRISPR-Cas12a) 的检测极限.
• 在≥1 × 10−4 μg/μL未放大DNA度下确定了DNA报告者的有效裂变.
• 在50个临床样本中,在检测方法中表现出一致的结果.

结论:

• 建立了第一个嵌套PCR-CRISPR-Cas12a集成用于E. bieneusi检测.
• 使用非放大DNA量化确定Cas12a检测极限.
• 该方法是快速的,具体的,敏感的,并且可以适应不同的实验室环境.