在体外评估rAAV9载体的生物潜能

科学领域:

• 基因治疗向量发展发展向量
• 生物技术和生物加工
• 分子和细胞生物学分子和细胞生物学

背景情况:

• 复合腺相关病毒 (AAV) 基因疗法载体需要强大的功效测定用于临床应用.
• AAV血清型9 (AAV9) 是神经遗传性疾病的有希望的载体,因为它具有神经向性和穿透血脑屏障.
• 现有的AAV9功效测定与常用的细胞系面临挑战,需要使用替代方法.

研究的目的:

• 开发和验证一种基于细胞的功效测试,用于表达人类N-硫黄糖胺硫化酶 (hSGSH) 的自补AAV9载体.
• 评估人类肝瘤 (HuH-7) 细胞系对评估AAV9载体感染和转基因表达的适用性.
• 为了确认开发的AAV9功效测试的可靠性,可重复性和稳定性.

主要方法:

• 使用HuH-7细胞系建立了基于细胞的功效测定,以评估通过scAAV9-hSGSH载体感染.
• 转基因表达 (SGSH 生产) 和载体基因组副本在转化 HuH-7 细胞中得到量化.
• 分析了载体剂量与生物反应 (SGSH表达,基因组拷贝) 之间的相关性;评估了长期储存下的测试可重复性和载体稳定性.

主要成果:

• 在感染scAAV9载体时,HuH-7细胞可复制地表达hSGSH转基因,从而产生可测量的SGSH.
• SGSH表达和载体基因组副本与病毒载体剂量有很强的线性相关性 (R2 = 0.71-0.95).
• 该试验显示出高可靠性和可重复性,试验内和试验间的变化系数分别低于20%和25%;长期储存 (2,5年在2-4°C) 不影响载体生物潜力.

结论:

• 使用HuH-7细胞成功开发了针对rAAV9载体的实用和可靠的体外基于细胞的功效测定.
• 这种测试有效地评估了AAV9的生物潜能,为基因治疗产品的质量控制提供了动物模型的有价值的替代方案.
• 这些发现支持AAV9基因治疗载体的功能质量和一致性,这对于临床转化至关重要.