开发一种补充试验,以监测泛冠状病毒3C类蛋白酶活动

科学领域:

• 病毒学 病毒学
• 抗病毒药物开发 抗病毒药物开发
• 分子生物学分子生物学

背景情况:

• 冠状病毒存在重大流行病风险,需要广泛的抗病毒策略.
• 3C类蛋白酶 (3CLpro) 是冠状病毒复制的关键酶,也是抗病毒疗法的首要目标.
• 现有的测试通常针对某些冠状病毒,限制了它们在流行病准备中的实用性.

研究的目的:

• 适应和验证先前开发的基于细胞的测试,用于监测各种人类冠状病毒的3C类蛋白酶活性.
• 通过评估不同的蛋白酶分裂部位来优化试验,以提高信号与背景的比率.
• 为了证明该试验在识别广谱3CLpro抑制剂方面的有效性.

主要方法:

• 调整了针对SARS-CoV-2 3CLpro设计的双露西法酶记者试验,以评估其他六种人类冠状病毒 (SARS-CoV,MERS-CoV,HCoV-NL63,HCoV-229E,HCoV-OC43,HCoV-HKU1) 的活性.
• 测试了各种蛋白酶分裂部位,包括NSP4-NSP5和超活性基质 (SAS),以最大限度地提高测试动态范围.
• 使用已知的广谱3CLpro抑制剂GC376.6验证了试验的性能.

主要成果:

• 适应试验成功测量了3CLpro在多种人类冠状病毒物种中的活性.
• Nsp4-Nsp5分裂部位和SAS基质为大多数测试的冠状病毒提供了最大的动态范围.
• 在用GC376治疗后观察到递质活性增加,证实了测试检测3CLpro抑制的能力.

结论:

• 改进的基于细胞的测试对评估3CLpro在一系列人类冠状病毒中的活性是有效的.
• 这种多功能测试平台可以加速新型泛冠状病毒抑制剂的发现和开发.
• 该测试通过快速选潜在的抗病毒化合物,促进了对未来的冠状病毒疫情的准备.