一种全自动化的新型固相提取方法,用于通过LC-MS在多种组织中进行siRNA药物提取和定量

科学领域:

• 药理动力学和药物新陈代谢
• 分析化学 分析化学
• 生物技术是生物技术.

背景情况:

• 传统的寡核酸提取方法,如液体-液体提取 (LLE),通常是多步骤和特定于组织的.
• 为各种组织类型开发一种通用的一步固相提取 (SPE) 方法仍然是一个挑战.

研究的目的:

• 开发和验证一种通用的一步SPE方法,用于从多种组织类型中治疗性提取寡核酸.
• 为了提高效率和减少工作量,自动化样品准备过程.

主要方法:

• 使用反感性寡核酸 (ASO) 内部标准和小干扰RNA (siRNA) 分析剂开发了一种单步SPE方法.
• 该方法是完全自动化的,使用液体处理器和自动化SPE站.
• 使用液态染色体质谱法 (LC-MS) 进行量化,并在代用矩阵中进行校准.

主要成果:

• 自动化SPE方法成功量化了siRNA在三个物种的9个不同的组织中.
• 使用in-vivo样本与LLE进行比较,证明了这两种提取技术之间的良好一致性.
• 代用矩阵校准方法证明对各种组织类型有效.

结论:

• 本文所介绍的单步SPE方法显著降低了空白组织要求和样品准备工作量.
• 全自动化和替代矩阵校准简化了组织生物分布研究的生物分析.
• 这种方法简化了分析,减少了时间,并与3R原则 (替换,减少,改进) 保持一致.