快速等位基因区分的协议 qPCR对Winnie小鼠模型的基因定型

科学领域:

• 遗传学 是一个遗传学.
• 分子生物学分子生物学
• 动物模型 动物模型

背景情况:

• 威尼小鼠是研究炎症性肠病 (IBD) 的有价值的体内模型.
• 这些小鼠在Muc2基因中具有特定的误解突变,这对IBD研究至关重要.
• 准确和高效的基因型鉴定对于在实验研究中利用Winnie小鼠至关重要.

研究的目的:

• 开发和介绍一个快速和可靠的基因定型协议,为小鼠.
• 为了能够准确地识别Winnie小鼠中的Muc2基因突变 (p.Cys52Tyr).
• 为其他点突变基因型定型提供一种可适应的方法.

主要方法:

• 使用的TaqMan等位基歧视定量PCR (qPCR).
• 开发了一种涉及组织采集和快速原始DNA提取的协议.
• 采用双标记的水解探头用于基于探头的放大和基于光的基因型调用.
• 将所有步骤集成到一个反应中,以提高效率.

主要成果:

• 在没有后放大处理的情况下成功建立了定性SNP基因型化协议.
• 证明了野生类型,异合体和突变Muc2等位基因的快速歧视.
• 该协议与标准的实时PCR仪器兼容.
• 从原始DNA中实现高吞吐量基因定型,实践时间最小.

结论:

• 提出的TaqMan qPCR协议提供了一种有效的基因定型Winnie小鼠的方法.
• 这一协议有助于对Muc2 p.Cys52Tyr突变进行快速准确的基因分析.
• 该方法的适应性使其适用于对其他定义点突变的基因型定型.