对Mycoplasma hyopneumoniae的快速量化方法的比较评估和验证:开发基于PMA的活力qPCR测定

科学领域:

• 兽医微生物学 兽医微生物学
• 细菌病原体的产生
• 分子诊断学 分子诊断

背景情况:

• 菌性肺炎 (Mycoplasma hyopneumoniae) 引起猪类动物性肺炎,导致猪肉行业遭受重大经济损失.
• 准确量化M. hyopneumoniae是具有挑战性的,因为它在体外生长缓慢,使疾病管理和根除工作复杂化.
• 像CCU和CFU这样的现有量化方法耗时,需要更快,更可靠的替代方法.

研究的目的:

• 评估和比较M.hyopneumoniae的各种量化方法,包括CCU,CFU,流细胞计和ATP光度计.
• 为了验证实时定量方法,特别是定制的活力定量PCR (v-qPCR) 试验,以准确检测M. hyopneumoniae.
• 建立可活和不可活的M. hyopneumoniae细胞的快速分化的协议.

主要方法:

• 在实验室中,使用CCU,CFU,流细胞计和ATP光度计评估了三种M. hyopneumoniae菌株的生长动力学.
• 协焦激光扫描显微镜 (CLSM) 用于直接量化和验证流细胞计结果.
• 一种基于PMA的v-qPCR测定被开发和优化,用于量化可行的M. hyopneumoniae.

主要成果:

• 跨CFU,CCU,流细胞计和ATP光度计的生长动力学显示出类似的动态和高相关性.
• 流细胞计和CLSM表明232菌株有强烈的相关性 (r=0.9973) 和J菌株有中度的相关性 (r=0.8933).
• 开发的v-qPCR试验与流动细胞计量 (R2 > 0.86) 的可活细胞计数有很强的相关性,并达到5×104个可活细胞/mL的检测极限.

结论:

• 这项研究介绍了首个基于PMA的v-qPCR测定对真菌等离子体物种的验证,提供了一个快速量化替代方案.
• 已建立的流细胞计和CLSM协议使可活和不可活的M. hyopneumoniae能够快速区分.
• 这些先进的方法将量化时间从几周缩短到几个小时,有可能提高M. hyopneumoniae根除计划.