建立基于抗体的新型多式高灵敏免疫测试平台,用于在农业样本中检测Bacillus thuringiensis Vip3Aa毒素

科学领域:

• 农业科学 农业科学
• 生物技术是生物技术.
• 分析化学 分析化学

背景情况:

• 来自Bacillus thuringiensis (Bt) 的Vip3Aa毒素对于转基因作物的杀虫特征至关重要.
• 敏感且可靠的Vip3Aa毒素检测方法对于农业监测和监管合规至关重要.

研究的目的:

• 开发和验证用于敏感和特定检测Vip3Aa毒素的新型免疫测试格式.
• 建立用于实验室定量和快速现场查Vip3Aa毒素在农业样本中的方法.

主要方法:

• 产生一种高亲和度的抗Vip3Aa毒素单克隆抗体 (H12-mAb) 和多克隆抗体 (Y26-pAbs).
• 三种免疫测试平台的开发:双抗体三明治ELISA (DAS-ELISA),聚合诱导的发射光免疫测试 (AIE-FLIA) 和基于黄金纳米粒子的侧向流免疫测试 (AuNPs-LFIA).
• 在农业矩阵中验证测试性能,评估检测极限 (LOD),回收和变化系数 (CV).

主要成果:

• 开发出的抗体表现出高的结合亲和力.
• 免疫试验实现了低检测极限:9.68 ng/mL (DAS-ELISA),1.95 ng/mL (AIE-FLIA) 和31.25 ng/mL (AuNPs-LFIA),所有这些都低于转基因组织中的Vip3Aa表达水平.
• 优秀的方法性能得到了证实,高的内部和测试间恢复 (分别为90.3-99.1%和83.6-99.9%) 和低的CVs (1.4-10.6%).
• AIE-FLIA和AuNPs-LFIA已经证明了现场查的实际适用性.

结论:

• 开发的多模式免疫试验为Vip3Aa毒素残留分析提供了强大的工具.
• 这些试验既能准确地进行实验室定量,又能快速地在现场进行查,支持对表达Vip3Aa的转基因作物的农业监测.