通过实时核酶消化进行高通量Aptamer表征

科学领域:

• 生物技术和分子生物学
• 分析化学 分析化学
• 生物化学 生化学

背景情况:

• 由于它们的高亲缘关系结合,aptamers是各种应用的有价值的生物识别元素.
• 准确地和在高吞吐量下表征阿巴 - 连接物相互作用仍然是一个重大挑战.
• 以前的外核酶消化试验提供了平行,无标签的选,但缺乏足够的吞吐量.

研究的目的:

• 开发下一代,高通量检测试剂,用于选阿巴 - 配体相互作用.
• 为了提高效率,精度和简单的aptamer表征.
• 为了实现无标签的,实时监测阿普坦酶结合.

主要方法:

• 开发一种实时外核酶 (RT-Exo) 测定方法,使用一种原性阿普坦米尔记者.
• 通过使用自动阅读器实时监测阿普坦体的外核分解性消化.
• 在不同的条件下,对RT-Exo试验的验证,使用不同的体和标.

主要成果:

• 在RT-Exo测试中,通过减少劳动力和资源,实现了比以前的方法高出数量级的吞吐量.
• 该试验在不同的体结构和标性质中显示出强大的性能.
• 在选突变物中成功应用,用于结构活性研究和对120种芬太尼类同类物进行单次结合的分析.

结论:

• 该RT-Exo试验显著提高了胺体表征的吞吐量,精度和简单性.
• 这种方法简化了选aptamer-ligand相互作用的过程.
• RT-Exo测定是一种强大的工具,用于推进基于aptamer的应用和研究.