基于CRISPR-Cas的诊断,用于在治疗场所检测性传播感染:实验室开发和评估研究

科学领域:

• 分子诊断学 分子诊断
• 这就是CRISPR技术.
• 传染病检测 发现 传染病检测

背景情况:

• 及时诊断性传播感染 (STIs) 对于有效治疗和减少传播至关重要.
• 目前的诊断方法可能不适合快速,点的护理设置.
• 需要开发一个便携式的多重测定方法.

研究的目的:

• 开发和评估一个基于CRISPR的便携式,多重测试面板,用于检测尼塞利亚淋病,克拉米迪亚,Treponema pallidum和简单疹病毒 (HSV).
• 包括检测尼塞利亚淋病中抗素耐药性标志物 gyrA S91F 的检测.
• 评估检测小组在护理地点的性能.

主要方法:

• 开发和优化使用同热放大和CRISPR-Cas反应的四种基于CRISPR的多重测定 (cTP-HSV和cNG-CT).
• 包括检测HSV-1/HSV-2分化的反射测试和检测Neisseria gonorrhoeae耐药性标志物.
• 分析验证包括特异性和检测极限 (LODs),随后对900个临床样本进行追溯一致性研究,使用qPCR作为参考标准.

主要成果:

• TP-HSV测定表明对T pallidum (82.5%) 和泛HSV (94.4%) 的高灵敏度,LOD分别为6.2和7.8副本/μL.
• NG-CT测定显示N. gonorrhoeae的灵敏度为80.0%,C. trachomatis的灵敏度为73.0%,两者的LOD为3.9副本/μL.
• 反射测试获得HSV-1 (97.0%) 和HSV-2 (96.0%) 的高灵敏度,但对 gyrA S91F标记物的灵敏度有所不同 (总体为63.1%,生殖器样本为85.7%).

结论:

• 开发的基于CRISPR的平台符合世卫组织针对N. gonorrhoeae和T. pallidum检测的目标产品配置文件.
• 对于 gyrA S91F检测的概念验证表明了对抗性引导性传染病治疗的潜力.
• 该测试套件显示出快速,分散和耐药性告知性传播感染的诊断的前景,特别是在资源有限的环境中,尽管需要进一步优化.