开发基于NanoBiT的高吞吐量选试验,用于发现NOS1-NOS1AP相互作用抑制剂

科学领域:

• 生物化学 生物化学
• 神经科学是一个神经科学.
• 药理学 药理学是指药理学的学科.

背景情况:

• 神经元氧化合成酶 (NOS1) 与其适配蛋白NOS1AP之间的相互作用对神经功能至关重要,并与各种疾病有关.
• 准这种蛋白质-蛋白质相互作用是一个有前途的治疗策略,但发现抑制剂一直很困难.

研究的目的:

• 开发和验证基于NanoBiT的发光补充试验,用于NOS1-NOS1AP相互作用抑制剂的高通量选 (HTS).
• 为了确定NOS1-NOS1AP相互作用的新型小分子抑制剂.

主要方法:

• 工程NOS1和NOS1AP蛋白与纳米BiT子单元 (HiBiT和LgBiT) 融合.
• 已建立稳定的中国仓鼠卵巢-K1 (CHO-K1) 细胞系用于信号生成.
• 使用已知的抑制剂 (TAT-GESV) 验证了测试,并选了10240种化合物的库.

主要成果:

• 纳米BiT试验表现出高性能,信号与背景比>240.0.
• 选确定了19个经过验证的打击化合物,其中大多数具有IC50值<30μM.
• 前三种化合物表现出强烈的抑制作用,IC50值<5μM.

结论:

• 开发的NanoBiT试验是一种可靠和高效的平台,用于发现NOS1-NOS1AP相互作用的抑制剂.
• 这种试验可以适应其他蛋白质与蛋白质相互作用的HTS,在药物发现中具有广泛的应用性.