使用哺乳动物表达的重组蛋白质的Clec12a结合的定向进化
Yoshirou Kawaguchi1, Md Samiul Islam1,2, Mina Yokoyama1
1Department of Applied Chemistry, Graduate School of Engineering, Kyushu University, 744 Motooka, Nishi-ku, Fukuoka, 819-0395, Japan.
Biochemistry and biophysics reports
|March 9, 2026
概括
研究人员开发了一种可扩展的哺乳动物表达系统,以产生Clec12a细胞外域,用于免疫研究. 这种系统使得发现了针对Clec12a表达树突细胞的新型酸结合剂,用于免疫调节应用.
科学领域:
- 免疫学 免疫学 免疫学
- 分子生物学分子生物学
- 生物化学 生化学
背景情况:
- 像Clec12a这样的C型乳素受体 (CLR) 在免疫平衡中起着至关重要的作用.
- 在髓状细胞上表达的Clec12a传递抑制信号,有助于免疫调节.
- 之前对小鼠Clec12a细胞外域的生产缺乏对连接体发现和可扩展性数据的既定适用性.
研究的目的:
- 建立一个可扩展的哺乳动物表达系统,用于小鼠Clec12a细胞外域 (mClec12a ECD).
- 利用产生的mClec12a ECD作为有针对性的进化诱,以发现新结合剂.
- 为了验证发现的的结合性和潜在应用,以向Clec12a阳性细胞.
主要方法:
- 建立了一个哺乳动物表达系统,产生大约80 mg/L的mClec12a ECD.
- 包含一个介素-2信号,用于从Expi293细胞中有效分泌.
- 使用mClec12a ECD诱的核糖体显示技术来分离结合,然后进行亲和度确定和初级细胞结合测试.
主要成果:
- 通过适当的N-糖基化,以可复制的方式获得净化mClec12a ECD的高产量,这表明蛋白质成熟正确.
- 成功分离了三种mClec12a结合 (CBPs),其中CBP2表现出最高的亲和力 (KD ≈ 6.29 μM).
- 证明CBP2与初级树突细胞结合,证实了用于选择的重组mClec12a的功能完整性.
结论:
- 开发的哺乳动物表达系统提供了一个可扩展和可靠的功能mClec12a ECD来源,用于连接体发现.
- 已识别的,特别是CBP2,代表了有前途的第一代配体,用于向Clec12a阳性细胞.
- 这些发现为开发利用Clec12a特异性连接体的向免疫调节疗法奠定了基础.
