将PBMC分离方法进行比较,并评估表观遗传免疫细胞量化作为PBMC的质量控制

科学领域:

• 免疫学 免疫学 免疫学
• 细胞生物学 细胞生物学
• 生物技术是生物技术.

背景情况:

• 实体全血的稳定性有限,需要隔离外周血液单核细胞 (PBMCs) 来进行下游分析.
• PBMC质量至关重要,受到各种预隔离和净化参数的影响.
• 目前PBMC的关键质量指标 (KPIs),如生命力和细胞计数,存在局限性.

研究的目的:

• 评估净化参数对PBMC质量指标的影响.
• 引入和评估表观遗传免疫细胞分析作为额外的绩效指标.
• 为了比较表观遗传分析与流细胞计量用于免疫细胞量化.

主要方法:

• 抗凝剂,采集管,储存温度和时间对PBMC质量的研究影响.
• 评估分离矩阵和净化协议.
• 利用基于qPCR的表观遗传免疫细胞计数和流细胞计量进行分析.

主要成果:

• 根据管类型/抗凝剂,预净化温度和时间,PBMC质量显著变化.
• 预净化样品完整性损失无法通过下游协议纠正.
• 从抽血到净化时间的增加导致了较高的颗粒细胞污染,降低了PBMC的纯度.

结论:

• PBMC质量主要取决于加工时间,这是样品物流中的关键因素.
• 由于潜在的颗粒细胞污染,标准的关键关键指标 (活力,恢复) 是有限的.
• 通过表观遗传学分析测量的拟议的"真实恢复" (淋巴细胞和单细胞恢复) 为临床试验提供了更可靠的质量参数.