检测免疫光和定量分析依赖pH的转录凝缩物的协议
Zhongyang Wu1, Krishnan Raghunathan2, Zhe Zhong2
1Division of Gastroenterology, Hepatology and Nutrition, Department of Pediatrics, Boston Children's Hospital and Harvard Medical School, Boston, MA 02115, USA; Broad Institute of Massachusetts Institute of Technology and Harvard, Cambridge, MA 02142, USA.
STAR protocols
|March 12, 2026
概括
这项研究详细介绍了一种可视化和测量巨细胞中BRD4凝聚物的方法. 酸性pH影响这些转录凝聚物,影响细胞过程.
科学领域:
- 细胞生物学 细胞生物学
- 分子生物学分子生物学
- 生物物理学的生物物理.
背景情况:
- 转录凝聚物是调节基因表达的动态核结构.
- BRD4和MED1是这些冷凝液的关键组成部分.
- 像pH值这样的环境因素会影响冷凝的组装和功能.
研究的目的:
- 建立一个用于成像和量化巨细胞中的BRD4凝聚物的协议.
- 为了研究酸性pH在BRD4凝结物形成中的作用.
主要方法:
- 用受控pH介质制备的巨细胞培养.
- 为BRD4.4进行免疫光染色.
- 同焦点和超分辨率显微镜 (空气扫描,STED).
- 使用FIJI,CellProfiler和MATLAB进行图像分析.
主要成果:
- 在巨细胞中成功成像和定量BRD4凝聚物.
- 证明BRD4凝聚剂组件的pH依赖调节.
- 建立一个强大的成像和分析管道.
结论:
- 提出的协议使得BRD4凝结物的详细研究成为可能.
- 酸性pH是巨细胞中BRD4凝聚物形成的关键调节者.
- 这项工作为了解细胞调节中的凝结力学提供了基础.
更多相关视频
06:38High Sensitivity Measurement of Transcription Factor-DNA Binding Affinities by Competitive Titration Using Fluorescence Microscopy
Published on: February 7, 2019
9.3K
09:57Workflow for High-content, Individual Cell Quantification of Fluorescent Markers from Universal Microscope Data, Supported by Open Source Software
Published on: December 16, 2014
13.6K