开发和验证三重RT-qPCR试验,用于快速临床诊断和猫传染性腹膜炎病毒的血型鉴定

科学领域:

• 兽医病毒学 兽医病毒学
• 分子诊断学 分子诊断
• 猫类传染病 猫类传染病

背景情况:

• 猫传染性腹膜炎 (FIP) 是一种严重且往往致命的猫病,由猫传染性腹膜炎病毒 (FIPV) 引起.
• 精确诊断FIPV是具有挑战性的,复杂的两个不同的血清型 (I和II) 由尖端 (S) 蛋白显著的序列分歧产生的.
• 血清型I在欧洲和北美普遍存在,而血清型II在亚洲更为普遍,需要地理意识的诊断方法.

研究的目的:

• 开发一种新型的三倍逆转录定量PCR (RT-qPCR) 试验,用于同时检测和测定FIPV的血型.
• 评估试验的灵敏度,特异性,线性和可重复性,以获得可靠的临床应用.
• 在一组猫科动物临床样本中评估FIPV血清型的流行率.

主要方法:

• 设计的原料和TaqMan探针针对FIPV尖端 (S) 基因的保存核体 (N) 基因和血清型特定区域.
• 针对三重RT-qPCR测定,优化反应条件,包括火温度 (64°C) 和原始探针度.
• 使用特征标准和63个临床猫科动物样本验证了试验的性能,评估了线性,效率,特异性,检测极限和可重复性.

主要成果:

• 三重RT-qPCR试验显示出出色的线性 (R2>0.99),高放大效率 (97.39109.97%),没有与其他猫病原体的交叉反应.
• 该试验实现了低检测极限 (0.5副本/μL) 和高可重复性 (变化系数<2.1%).
• 对63个样本的临床验证显示,FIPV总体阳性率为21.63%,血清型II (17.46%) 比血清型I (3.17%) 显著更为普遍.

结论:

• 开发的三重RT-qPCR测定是一种高度敏感,特定和可重复的工具,用于同时检测和FIPV的血型.
• 这种试验可促进FIPV的快速临床诊断,并提供有关血清型分布的有价值的流行病学数据.
• 该测试能够同时检测猫科冠状病毒 (FCoV) 和FIPV血型定型,提高猫科呼吸道和肠道疾病的诊断能力.