在体内直接将基因转移到猪心肌中,使用具有复制缺陷的腺病毒载体

科学领域:

• 心血管研究研究心血管研究
• 基因治疗 基因治疗
• 分子生物学分子生物学

背景情况:

• 为心肌细胞开发高效的基因传递方法对于针对心脏病的体细胞基因治疗至关重要.
• 之前在动物和狗身上进行的研究显示了这种潜力,但缺乏关于蛋白质生产和大型动物应用的定量数据.

研究的目的:

• 评估复制缺陷的腺病毒 (Ad5) 载体在大型动物心脏中直接内心注射用于基因表达的疗效和安全性.
• 为了比较Ad5载体的基因传输效率与在心肌中注射的等离子体DNA.

主要方法:

• 携带 luciferase 或 lacZ 记者基因的复制缺陷的 Ad5 载体被注射到成年猪的腹腔心肌中.
• 用超声波晶体评估心肌功能.
• 记者基因表达 (露西法酶活性和β-银酸酶染色) 在不同的时间点被量化.

主要成果:

• 直接内心注射Ad5载体并没有损害区域性心肌功能.
• 露西法酶表达在注射后7天达到峰值,随后下降.
• 腺病毒介导的基因转移比塑体DNA注射高14万倍,几乎所有感染细胞都是心肌细胞,尽管表达仅限于注射部位5毫米以内.

结论:

• 直接注射心内Ad5载体使得大型动物心肌细胞中的重组基因表达成为可能,这与人类生理学有关.
• 腺病毒载体在心肌基因转移方面表现出明显高于等离子体DNA的效率.
• 为了克服免疫反应和临床应用的有限分布,需要进一步开发较少免疫性载体和改进的施用方法.