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对复制小鼠白血病病毒逆转录酶的足迹分析
B M Wöhrl1, M M Georgiadis, A Telesnitsky
1Division of Infectious Diseases, Case Western Reserve University School of Medicine, Cleveland, OH 44106.
Science (New York, N.Y.)
|January 6, 1995
概括
使用酶足迹研究研究了小鼠白血病病毒逆转录酶 (MLV RT) 和缺乏RNase H活性的变体. 这两种酶主要保护模板-primer重复体,挑战先前的结构预测.
科学领域:
- 分子生物学分子生物学
- 酶学 是一种酶学.
- 病毒学 病毒学
背景情况:
- 小鼠白血病病毒逆转录酶 (MLV RT) 对于复原病毒复制至关重要.
- 了解RTs的精确绑定和保护机制对于药物开发至关重要.
- 之前的DNA聚合酶结构模型表明了不同的结合模式.
研究的目的:
- 想象由野生型MLV RT和缺乏RNase H活性的变体 (delta RH MLV RT) 形成的复制复合体.
- 为了确定这些酶对模板和原料核酸的保护程度.
- 将绑定特征和保护模式与现有的结构预测进行比较.
主要方法:
- 酶足迹被用来绘制模板和原始核酸受酶保护的区域.
- 实验使用野生型MLV RT和三角形RHMLV RT变种进行.
- 在不同的离子强度条件下评估了结合亲和力.
主要成果:
- 野生类型的MLV RT受保护模板核酸从+6到-27和原始核酸从-1到-26.
- 德尔塔RH MLV RT仅在降低的离子强度下显示稳定的模板-primer结合,保护到 -15.位置.
- 这两种酶都主要保护了模板-primer双重复合区域,无论水解概况如何.
结论:
- MLV RT及其三角形RH变体的结合和保护模式主要涉及模板-primer双联.
- 这些发现与最近基于DNA聚合酶β的结构预测相矛盾.
- RNase H 域会影响稳定结合,但不会影响主要的双重保护部位.