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从重组子单元组建转录活性RNA聚合酶I启动因子SL1的组合

J C Zomerdijk¹, H Beckmann, L Comai

¹Howard Hughes Medical Institute, Department of Molecular and Cell Biology, University of California, Berkeley 94720-3204.

Science (New York, N.Y.)

|December 23, 1994

概括

研究人员重建了SL1复合体,这对核糖体RNA合成至关重要. 再组合的TATA结合蛋白 (TBP) 和TAFIS 110,63和48一起形成了一个活性复合体,证明了它们对转录的必要性和充分性.

科学领域:

分子生物学分子生物学
基因规则基因规则
蛋白质生物化学蛋白质生物化学

背景情况:

核糖体RNA (rRNA) 合成对细胞生长至关重要,主要由RNA聚合酶I主导.
促进子选择性因子SL1对于启动RNA聚合酶I的rRNA合成是不可或缺的.
SL1包括TATA结合蛋白 (TBP) 和三个TBP相关因子 (TAFI):TAF110,TAF63和TAF48.

研究的目的:

为了研究功能SL1复合物的体内和体外组装.
确定SL1复杂活动的必要和足够的组件.
描述重组TAFI和TBP在支持rRNA基因转录中的作用.

主要方法:

TBP和TAFI的复合表达和净化 (110, 63, 48).
在实验室中使用重组蛋白质组装SL1复合体.
在体内和体外转录分析使用人类核糖体RNA基因促进剂.
复制和内源SL1复合体之间的转录活性的比较分析.

主要成果:

从重组TBP和TAFI 110,63和48中成功组装了功能SL1复合体.
含有所有四个组成部分的复合SL1复合物表现出与内源SL1相比的转录支持活性.
缺少TBP的部分复合物在体外显示转录支持活性显著降低.
发现TBP和TAFI 110,63和48对于重组活性SL1.1来说是必要和充分的.

结论:

该研究成功地使用重组TBP和TAFI重建了一个转录活性SL1复合体.
这些发现证实TBP,TAF110,TAF63和TAF48是SL1.1的重要组成部分.
重建的SL1复合体为进一步对rRNA基因转录启动的机制研究提供了有价值的工具.

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