再组合的稳基酶变体具有改变的免疫活性. 一:构造和表征
D Collen1, R Bernaerts, P Declerck
1Center for Molecular and Vascular Biology, University of Leuven, Belgium. collen@med.kuleuven.ac.be
Circulation
|July 15, 1996
概括
蛋白质工程通过突变关键表位素来降低稳酶免疫性. 由此产生的突变在患者中显示了抗体识别的减少,这表明在心肌梗塞中改善血栓解压疗法的潜力.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 蛋白质工程是指蛋白质工程.
- 免疫学 免疫学 免疫学
背景情况:
- 复合性稳定酶是一种有前途的急性心肌梗塞的血栓缓解剂.
- 它的临床使用受到免疫性限制.
- 减少异质蛋白免疫性蛋白质工程策略的蛋白质工程策略尚未得到充分探索.
研究的目的:
- 通过局部特异性突变发生来降低复合稳酶 (SakSTAR) 的免疫性.
- 为了识别和消除关键的免疫主导表位.
- 评估突变对SakSTAR活性和抗原性的影响.
主要方法:
- 单克隆抗体表位图绘制在SakSTAR中发现了三个不重叠的免疫主导表位.
- 用局部导向的突变发生来用氨酸替换带电氨基酸,针对两个表位.
- 组合突变 (SakSTAR.M38和SakSTAR.M89) 被构建,表达和净化.
- 进行了特定活性和抗体吸收测试.
主要成果:
- 两个主要的免疫主导表位被通过突变发生成功地消除了.
- 突变变种 (SakSTAR.M38,SakSTAR.M89) 显示与单克隆抗体的反应性降低.
- 这些突变保留了SakSTAR的约50%的特异性活性.
- 抗体吸收研究表明,突变体对患者引起的抗体有不完全的减少 (<90%).
结论:
- 萨克斯塔尔具有三种免疫主导表位;两种通过突变发生被消除.
- 由此产生的组合突变体表现出维持的特异性活性和患者抗体的识别能力降低.
- 这些工程化稳酶变体需要进一步研究它们的血栓溶解和抗原性质.
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