Una tercera polimerasa esencial del ADN en S. cerevisiae.

Área de la Ciencia:

• Biología Molecular Biología Molecular
• Genética La genética.
• La bioquímica es la bioquímica.

Sus antecedentes:

• Se sabe que las polimerasas de ADN I y III son esenciales para la viabilidad de Saccharomyces cerevisiae (levadura).
• El papel y la esencialidad de otras polimerasas de ADN nuclear, como la ADN polimerasa II, en la replicación de la levadura siguen siendo menos comprendidos.

Objetivo del estudio:

• Clonar y analizar el gen POL2, que codifica la subunidad catalítica de la levadura ADN polimerasa II.
• Determinar la esencialidad de la ADN polimerasa II para la viabilidad de las células de levadura y la replicación del ADN.

Principales métodos:

• La clonación de genes y el análisis de POL2 en S. cerevisiae.
• Análisis de transcripción para determinar el tamaño del ARNm POL2.
• Análisis de la secuencia de proteínas para predecir el peso molecular e identificar dominios funcionales.
• Experimentos de alteración y deleción de genes para evaluar el impacto en la viabilidad celular y la actividad de la ADN polimerasa.

Principales resultados:

• El gen POL2 fue clonado y se encontró que expresaba una transcripción de 7,5 kb que codificaba una proteína de 255.649 Mr.
• La interrupción parcial de POL2 dio lugar a células viables con actividad de la ADN polimerasa II truncada.
• La eliminación completa del marco de lectura POL2 condujo a la inviabilidad y la morfología característica de detención de la replicación del ADN.
• La región N-terminal de la proteína predicha mostró una similitud de secuencia limitada con otras polimerasas de ADN eucariotas.

Conclusiones:

• Tres polimerasas de ADN nuclear (I, II y III) son esenciales para la viabilidad de S. cerevisiae.
• La ADN polimerasa II juega un papel crítico en la replicación del ADN, probablemente funcionando como una replicasa.
• La esencialidad de las tres polimerasas de ADN como replicas desafía los modelos existentes de replicación del ADN eucariota.