Cas9 especifica objetivos virales funcionales durante la adaptación CRISPR-Cas

Área de la Ciencia:

• Microbiología Microbiología.
• Biología Molecular Biología Molecular
• Inmunología Inmunología.

Sus antecedentes:

• Los procariotas poseen inmunidad adaptativa contra los virus a través de los sistemas CRISPR-Cas.
• Los sistemas CRISPR-Cas utilizan pequeñas moléculas de ARN para guiar a las nucleasas Cas hacia el ADN viral.
• Streptococcus pyogenes Cas9 requiere un motivo adyacente de protospacer (PAM) para la escisión del ADN.

Objetivo del estudio:

• Investigar el mecanismo de adquisición del espaciador en los sistemas CRISPR-Cas.
• Para determinar si Cas9 juega un papel en la selección de secuencias espaciadoras durante la adquisición.
• Para aclarar el papel del reconocimiento de PAM en la generación de la memoria inmunológica procariótica.

Principales métodos:

• Manipulación genética de alelos Cas9 para alterar el reconocimiento de PAM.
• Análisis de la especificidad de adquisición de espaciadores en Streptococcus pyogenes.
• Los ensayos de coinmunoprecipitación estudian las interacciones de las proteínas dentro de la maquinaria de adquisición.

Principales resultados:

• Cas9 reconoce directamente las secuencias PAM durante la adquisición del espaciador.
• Modificación o eliminación del motivo de reconocimiento PAM de la especificidad de adquisición de espaciador modificado Cas9.
• Cas9 interactúa con otras proteínas de adquisición (Cas1, Cas2, Csn2) para conferir especificidad PAM.

Conclusiones:

• Cas9 tiene una función novedosa en el reconocimiento de secuencias PAM durante la adquisición de nuevos espaciadores.
• Este reconocimiento de PAM por Cas9 es esencial para la especificidad de la inmunidad adaptativa de los procariotas.
• El estudio establece un nuevo mecanismo para la generación de memoria inmunológica en procariotas.