一个使用串行血FIB/SEM进行冷体积成像的协议.
Maud Dumoux1, Jake L R Smith2, Thomas Glen1
1Structural Biology, The Rosalind Franklin Institute, Harwell Science & Innovation Campus, Didcot, United Kingdom.
Methods in cell biology
|July 14, 2023
概括
这项研究详细介绍了使用串行血聚焦离子束扫描电子显微镜 (串行pFIB/SEM) 进行冷体积成像的协议. 该技术为相关显微镜提供高分辨率的生物样本近本地成像.
科学领域:
- 生命科学 生命科学
- 显微镜的使用方法
- 生物技术是生物技术.
背景情况:
- 相对体积电子显微镜 (vEM) 技术对于生物结构的高分辨率成像至关重要.
- 序列等离子聚焦离子束扫描电子显微镜 (序列pFIB/SEM) 是一种新兴的vEM方法,用于可视化未染色,冷保存的样品.
- 达到最佳的成像参数对于减少文物和实现下游分析至关重要.
研究的目的:
- 为优化串行pFIB/SEM参数提供一个详细的,无需硬件的协议.
- 为了最大限度地减少成像工件,并促进体积数据的计算处理和分析.
- 为了使近原生状态成像用于微尺度,大尺度和纳米尺度的相关成像.
主要方法:
- 为串行pFIB/SEM开发协议,专注于FIB和SEM参数的优化.
- 强调每个步骤的目的,以确保硬件和软件不可知论.
- 实现≤20-50nm分辨率和≤10-30μm视野的指导.
主要成果:
- 已经建立了一个针对串行pFIB/SEM的综合协议.
- 该协议解决了成像参数的优化,以减少文物.
- 该方法允许对细胞和组织进行近原始状态的成像.
结论:
- 开发的协议为使用串行pFIB/SEM的研究人员提供了宝贵的资源.
- 参数的优化是成功减少文物和数据分析的关键.
- 这种技术在多个尺度上推进了相关成像能力.
