可诱导的HEK293 AAV包装细胞系表达Rep蛋白质
Lovro Jalšić1,2, Viktoria Lytvyn2, Seyyed Mehdy Elahi2
1Département de Génie Chimique, Université Laval, Québec, QC G1V0A6, Canada.
Molecular therapy. Methods & clinical development
|August 10, 2023
概括
开发稳定的生产细胞系用于重组腺相关病毒 (rAAV) 生产具有挑战性. 这项研究成功地创建了可诱导的REP表达HEK293SF包装细胞,实现可扩展的rAAV标位,与标准方法相比.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 分子生物学分子生物学
- 细胞线工程 细胞线工程
背景情况:
- 复合腺相关病毒 (rAAV) 的可扩展生产对于基因疗法应用至关重要.
- 由于细胞静止的Rep蛋白,为rAAV生产创造稳定的包装细胞系是很困难的.
- 由于构成性E1A表达,HEK293细胞是哺乳动物生产rAAV的首选平台.
研究的目的:
- 为可扩展的rAAV生产开发稳定,可诱导的包装细胞线.
- 克服与生产细胞系中Rep蛋白表达相关的挑战.
- 为大规模的rAAV制造建立一个强大的系统.
主要方法:
- 经过工程设计的HEK293SF细胞具有酸盐/米素诱导基因表达系统.
- 使用lentiviral vector转导整合Rep 40和Rep 68基因. 使用lentiviral vector转导整合Rep 40和Rep 68基因.
- 使用具有不同表达水平的诱导性促进剂来控制Rep蛋白.
- 在悬浮中培养细胞,用于可扩展性的无血清介质.
主要成果:
- 生成稳定的HEK293SF克隆,表达可诱导的Rep蛋白.
- 获得了与标准的三重等离子体转染方法相比较的rAAV标位.
- 在连续培养中,克隆的稳定性可达7周.
- 使用无血清悬浮培养物验证了可扩展的rAAV生产 (1L波式生物反应器).
结论:
- 通过使用HEK293SF细胞成功创建了可诱导的AAV包装细胞线.
- 开发的细胞系使得可扩展和稳定的rAAV生产成为可能.
- 这代表了在基因治疗中有效制造rAAV的重大进展.
关键词:
在 AAV AAV AAV 中.HEK2933 这是一笔巨额资金.代表代表的代表是什么?基因治疗的基因疗法可诱导的表达方式制造业 制造业 是一个制造业.包装细胞的包装细胞.没有血清的血清.悬架悬架悬架悬架悬架悬架悬架悬架转化过程中的转化.更多相关视频
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