隔离方法确定刺激后的人类中性粒细胞的反应
Vanessa Krémer1,2, Ophélie Godon1, Pierre Bruhns1
1Institut Pasteur, Université Paris-Cité, Institut national de la santé et de la recherche (INSERM) Unité mixte de recherche (UMR)1222, Antibodies in Therapy and Pathology, Paris, France.
Frontiers in immunology
|December 11, 2023
概括
选择正确的中性粒细胞分离方法至关重要. 没有红细胞 (RBC) 溶解的方法,就像负免疫磁性选择一样,为准确的研究产生了不太活跃和更响应的中性粒细胞.
科学领域:
- 免疫学 免疫学 免疫学
- 细胞生物学 细胞生物学
- 血液学 血液学 血液学
背景情况:
- 中性粒细胞是关键的免疫细胞,但由于寿命短,缺乏增殖和对遗传操纵的抵抗性,研究它们具有挑战性.
- 血液采集和处理过程中的中性粒细胞激活可能会混实验结果,影响其纯度,激活状态和响应能力.
研究的目的:
- 评估五种常见的中性粒细胞分离方法对中性粒细胞产量,纯度,激活和反应能力的影响.
- 确定隔离协议,最好保持中性粒细胞的完整性和下游分析的功能.
主要方法:
- 评估了五种广泛使用的中性粒细胞分离技术.
- 监测表面标记物,反应性氧物种 (ROS) 生产和DNA释放 (作为中性粒细胞外细胞陷 (NET) 形成的替代物).
- 与红细胞 (RBC) 溶解和不溶解密度梯度离心对抗负免疫磁性选择的结果进行比较.
主要成果:
- 使用负免疫磁性选择和密度梯度方法而没有红细胞溶解分离的中性粒细胞显示出最小的激活,与全血中性粒细胞非常相似.
- 这些方法导致中性粒细胞激活程度较低,反应更好,而密度梯度方法需要RBC溶解.
- 隔离协议显著影响了中性粒细胞激活状态和功能反应.
结论:
- 选择中性粒细胞分离方法对实验结果产生重大影响,影响细胞激活和反应能力.
- 建议采用负免疫磁性选择和密度梯度方法,不使用红细胞溶解,以保持中性粒细胞的完整性.
- 中性粒细胞分离协议的标准化对于可靠的中性粒细胞子集表征和可重现的研究至关重要.
