产生编码抗HBV设计表观基因组的mRNA
Prashika Singh1, Tafadzwa Mlambo2, Kristie Bloom1
1Wits/SAMRC Antiviral Gene Therapy Research Unit, Infectious Diseases and Oncology Research Institute (IDORI), Faculty of Health Sciences, University of the Witwatersrand, Johannesburg, South Africa.
新的表观基因组编辑工具使用通过mRNA传递的设计表观基因组修饰剂 (DEM) 来准和静止慢性乙型肝炎病毒 (HBV) 复制. 这种方法为持续的HBV治疗提供了一个有前途的非变异性策略.
科学领域:
- 表观遗传学
- 病毒学
- 分子生物学
背景情况:
- 慢性乙型肝炎病毒 (HBV) 感染全球超过2.57亿人,导致严重的肝病死亡.
- 目前的抗病毒疗法在消除持续存在的HBV共价封闭圆形DNA (cccDNA) 储存器的能力上是有限的.
- 表观基因组编辑提供了一种针对病毒基因表达的新非变异性策略.
研究的目的:
- 开发和评估mRNA编码的设计表观基因组修饰剂 (DEM) 用于针对HBV的表观基因沉默.
- 通过去除免疫刺激双链RNA (dsRNA) 来优化mRNA的产生.
- 在细胞培养中评估DEM介导的HBVDNA转录抑制的有效性.
主要方法:
- 在关键HBV开放读取框架 (ORF) 中编码CpG岛屿的mRNADEMs的产生.
- 在pT7 ((AG) 平台上的DEM序列的体外转录.
- 净化mRNA以去除dRNA污染物,增强其表达.
- 用合成的mRNA感染培养细胞并评估HBVDNA的转录抑制.
主要成果:
- 成功合成用于HBV表观基因组修饰的编码DEM.
- 通过dSRNA去除协议实现了改善的mRNA表达.
- 通过DEMs在培养细胞中证明了HBVDNA的向转录抑制.
结论:
- 通过mRNA输送的DEM代表了长期HBV表观遗传沉默的可行策略.
- 这种方法最大限度地降低了与其他基因编辑技术相关的基因组整合和非目标效应的风险.
- 在慢性HBV感染中,表观遗传疗法可能具有持久的治疗效益.
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