使用单对象光片显微镜对多细胞系统进行快速体积光寿命成像.

科学领域:

• 生物医学光学 生物医学光学
• 显微镜的使用方法
• 细胞生物学 细胞生物学

背景情况:

• 光终身成像显微镜 (FLIM) 对于生物系统中的功能和多重生物成像至关重要.
• 目前的FLIM应用受限于采集速度缓慢和高光毒性,阻碍了活体样本研究.
• 自发光或传感器的寿命提供了生理学上相关的信息.

研究的目的:

• 开发一种更快,更温和的FLIM技术,用于实体样本成像.
• 为了克服常规FLIM中的速度和光毒性限制.
• 为了在活的多细胞标本上实现高速,体积和时隔FLIM.

主要方法:

• 整合单对象光片显微镜与脉冲激发和时间分辨率检测,使用一种新的SPAD阵列探测器.
• 实施扫描和静态光片模式用于基准测试.
• 量化协议评估与同焦点FLIM相比.

主要成果:

• 与共聚焦显微镜相比,FLIM采集速度实现了10-100倍的加速,图像采集时间低至100 ms.
• 在活的多细胞标本上使用基于生命周期的多重复合来证明3D体积FLIM.
• 在活体胚胎有机体上成功执行了张力探针的时间间隔FLIM.

结论:

• 开发的FLIM方法显著提高成像速度,降低光毒性,使其适合活体样本研究.
• 这种技术可以实现先进的应用,如3D多重成像和动态生物过程的时间间隔研究.
• 这些发现有助于将先进的FLIM功能集成到各种光板显微镜设置中.