Procesamiento in vitro de las moléculas precursoras de ARN de transferencia de B. mori

Área de la Ciencia:

• La bioquímica es la bioquímica.
• Biología Molecular Biología Molecular
• Procesamiento de ARN Procesamiento de ARN

Sus antecedentes:

• La ribonucleasa P (RNAasa P) y la nucleasa 3-5 son esenciales para la síntesis de tRNA en E. coli.
• Estas actividades enzimáticas también están presentes en las células de las glándulas de seda de Bombyx mori.

Objetivo del estudio:

• Para investigar el papel y las características de la RNAasa P y 3 -5 nucleasa en la síntesis de Bombyx mori tRNA.
• Para dilucidar el mecanismo de la maduración del pre-ARNt en las células del gusano de seda.

Principales métodos:

• Se utilizaron extractos subcelulares de las células de las glándulas de seda Bombyx mori.
• Los ensayos de escisión se realizaron utilizando E. coli y Bombyx mori pre-tRNAs.
• Se emplearon huellas dactilares de ARN y análisis de fosfato de 5 terminales.
• Se realizó un análisis de secuencia de los intermediarios de procesamiento in vitro.

Principales resultados:

• La RNAasa P de Bombyx mori rompió los pre-tRNA de E. coli de manera similar a la de la enzima de E. coli.
• La RNAasa P de Bombyx mori no cortó los sustratos de ARN no-t.
• Los pre-ARNt de Bombyx mori poseen 5 y 3 nucleótidos adicionales.
• Los extractos crudos eliminaron ambos nucleótidos adicionales, mientras que la RNAasa P purificada solo eliminó 5 nucleótidos.
• Sólo los grandes pre-tRNA de gusanos de seda fueron sustratos para Bombyx mori RNAasa P.

Conclusiones:

• Bombyx mori RNAasa P y 3 -5 nucleasa cooperan en la maduración del pre-ARNt.
• El procesamiento del pre-ARNt se produce en dos pasos: la eliminación de 5 nucleótidos por la RNAasa P, seguida del recorte de 3 nucleótidos por una 3 -5 nucleasa.