选择性综合在线NanoLCxCZE-MS平台用于自上而下的蛋白形分析

科学领域:

• 蛋白质组学是指蛋白质组学.
• 分析化学 分析化学
• 生物化学 生化学

背景情况:

• 高效的分离技术对于复杂的生物样本中全面的蛋白形状分析至关重要.
• 二维 (2D) 分离方法比一维 (1D) 方法具有更高的选择性和峰值容量.

研究的目的:

• 开发和介绍一种新的在线选择性综合2D平台,将逆相纳米LC与毛细管区域电泳质谱 (CZE-MS) 合起来.
• 将这个平台应用于完整的自上而下的 (TD) 蛋白质形状分析.
• 提高复杂生物样本中蛋白质形式的检测和表征.

主要方法:

• 开发一个在线选择性全面的2D平台,集成逆相纳米LC (1维) 和毛细管区电泳-质谱 (CZE-MS) (2维).
• 利用连续的多个离子聚合物层来增强CZE-MS分离.
• 分析了人类细胞溶解物,以评估平台的完整TD蛋白形特征表征的性能.

主要成果:

• 在相同的nanoLC时间窗口内,2D平台检测到与1D纳米LC-MS相比的两到四倍多的蛋白质形式.
• 对Histone H4的有针对性的分析确定了额外的蛋白质形式,其乙化和甲基化变异以前没有被1D纳米LC-MS检测到.
• 展示了该平台对先进完整蛋白形状分析的能力.

结论:

• 合的纳米LC和CZE-MS平台在完整的蛋白质水平上提供了显著改进的蛋白质形状检测和表征.
• 这种二维方法在复杂的生物矩阵中推进了向蛋白形分析.
• 开发的平台对未来的深入蛋白质组研究具有前途.